水解氨基酸测定仪（全自动氨基酸分析仪）核心是离子交换色谱+茚三酮柱后衍生，用于蛋白质/多肽水解后17种常见氨基酸的定性定量。以下是完整、标准化使用说明（通用日立、赛默飞、岛津等主流机型）。
一、开机前准备（关键）
1.环境与耗材检查
环境：室温20±2℃、湿度<70%、避光、无振动、稳压电源。
气体：高纯N₂（保护茚三酮、防氧化），压力0.05–0.1MPa。
试剂（必须色谱纯）：
洗脱缓冲液：pH2.2、3.3、4.0、6.4柠檬酸钠体系（A/B/C/D液）
衍生剂：茚三酮（含乙二醇甲醚、SnCl₂还原剂，现配现用、避光）
再生液：0.2mol/LNaOH、0.1mol/LHCl
标准品：氨基酸混合标准液（10–20nmol/μL）
耗材：
色谱柱：阳离子交换树脂柱（如日立#2622）
保护柱、0.22μm水相滤膜、进样瓶
2.试剂处理
缓冲液/茚三酮：0.45μm过滤+超声脱气15min。
氮气吹扫试剂瓶，隔绝空气。
3.仪器开机
开N₂钢瓶→开稳压电源→开主机→开电脑→启动软件。
温度设置：
柱温：58–70℃（梯度程序）
反应池：130–135℃
泵排气（Purge）：排除泵头/管路气泡。
系统平衡：
走起始缓冲液（pH2.2），基线平直、压力稳定（3–5MPa）方可进样。
二、样品前处理（成败关键）
1.酸水解（常规蛋白/多肽）
称样：固体样品50–100μg，精确至0.01mg。
水解：
加6mol/LHCl（含0.1%苯酚）10mL
充N₂3min→真空封管
110℃水解22–24h
赶酸：冷却→取1mL→60℃真空蒸干
复溶：加pH2.2柠檬酸钠缓冲液1–5mL溶解
过滤：0.22μm水相滤膜→进样瓶待测
2.特殊氨基酸处理
色氨酸：酸水解全破坏→改用碱水解（4mol/LLiOH,110℃,24h）
半胱氨酸/蛋氨酸：易氧化→水解前过甲酸预处理
酪氨酸：酸稳定，常规水解即可
三、仪器参数设置（标准）
1.方法编辑
分离模式：梯度洗脱（pH/盐浓度递增）
流速：柱泵0.4–0.6mL/min；茚三酮泵0.2–0.3mL/min
进样量：20μL
检测波长：
主波长：570nm（α-氨基酸，如Asp、Thr、Ser、Glu、Pro等）
次波长：440nm（亚氨基酸，Pro）
运行时间：30–60min（依柱型）
2.序列设置
先跑标准品1–2针（校准保留时间、峰面积）。
再跑样品，每20样插1针标准品质控。
最后跑空白/冲洗液。
四、进样与检测
样品瓶放入自动进样器，编辑序列。
启动运行，监控：
柱压：3–5MPa，波动<±0.1MPa
基线：平稳、无漂移、噪声<0.1mV
峰形：对称、无拖尾、分离度>1.5
异常处理：
压力高：保护柱/柱头堵塞→更换或反冲
峰拖尾：柱老化→再生或换柱
无峰：茚三酮失效/漏液→重配、查管路
五、关机与维护（每日/每周/每月）
1.当日关机
跑完样品→切换再生程序（0.2mol/LNaOH冲洗30min）。
再用保存液（pH6.4缓冲液）平衡30min。
关茚三酮泵→关柱温/反应池→待降温至<40℃关主机。
关N₂→关电源。
清洗进样针、进样盘。
2.每周维护
更换保护柱芯。
清洗混合器、单向阀、过滤器。
检查管路漏液、盐析。
3.每月维护
校准波长、流速、温度。
清洗反应盘管、检测器流通池。
长期不用：10%甲醇冲系统，色谱柱密封保存。
六、速记SOP
配试剂→开机→平衡系统
样品：酸水解→蒸干→复溶→过滤
进样：先标样→再样品→质控
数据：定性→定量→报告
关机：再生→冲洗→降温→断电
更新时间：2026-04-23
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氨基酸分析仪
